L’étude de la fonction d’une protéine implique souvent la mise en évidence de ses partenaires d’interaction. Une des techniques les plus utilisées est le double-hybride consistant à détecter les interactions in vivo dans la levure. Or, celle-ci est fastidieuse et conduit à de nombreux faux positifs. Clontech a développé, sur la base du système de référence GAL4, une nouvelle souche et des vecteurs plus faciles d'utilisation et générant moins de faux positifs et faux négatifs.

• Souche Y2H Gold comprenant quatre gènes rapporteurs contrôlés par 3 promoteurs différents pour réduire les interactions aspécifiques. Disponible séparément
  • Gène de résistance à l’auréobasidine A (antibiotique toxique pour la levure) inactif en l'absence d'interaction protéique, les levures sont non résistantes et donc tuées. Élimination du bruit de fond et réduction significative des faux positifs.
  • Deux marqueurs d’auxotrophie (histidine et adénine) pour varier la stringence du criblage
  • Identification des clones positifs par tests blanc-bleu avec l’a-galactosidase (gène MEL1) directement sur boîte
• Vecteurs pGADT7 et pGBKT7
  • Promoteur ADH1 : niveau d’expression élevé des protéines
  • Étiquettes c-Myc et HA : détection des protéines de fusion
  • Marqueurs de résistance aux antibiotiques distincts (Amp^R et Kan^R) : isoler facilement et rapidement les vecteurs
  • Promoteur T7 (transcription-traduction in vitro des ADNc) : confirmant les interactions par co-immunoprécipitation

MATCHMAKER™ Gold est une gamme complète :

•  Milieux complets et synthétiques pour la culture et la sélection des levures (format vrac, sets ou en sachets pré-pesés)
• Kit de transformation de levure
• Kit d’isolement de plasmide à partir de levure
• Banques d’ADNc à partir de différents tissus (pré-transformées et normalisées pour certaines)
• Kit de construction de banques : par recombinaison homologue en levure
• Anticorps anti-GAL4-AD, GAL4-BD, c-Myc et HA
• Kits de confirmation des résultats (en cellules mammifères ou in vitro par co-immunoprécipitation)
•  Système simple-hybride disponible : Matchmaker™ Gold Yeast One-Hybrid
• Etc...