L’expression d’une protéine est un moyen de mettre en évidence son rôle dans le fonctionnement cellulaire. Des systèmes constitutifs existent mais connaissent des limites, notamment pour l’étude des gènes impliqués dans la croissance cellulaire, ou toxiques (ex : apoptose). À cet égard, le système inductible Tet, largement utilisé dans la communauté scientifique, est le plus approprié.

 Système Tet-Express™ : plus rapide et plus simple, sans création de lignée stable Tet

Le système de 3ème génération Tet-On®3G propose des vecteurs et une protéine régulatrice Tet-On 3G optimisés améliorant significativement les performances du système initialement développé dans le laboratoire de Bujard (1) :

• Induction rapide et élevée (jusqu’à 27 000 fois)
• Bruit de fond exceptionnellement faible
• Possibilité de travailler en transfection transitoire
• Sensibilité vis à vis de l’inducteur 10 fois supérieure au système précédent, particulièrement utile en transgénèse pour les tissus difficilement accessibles (ex : SNC)

• Le système Tet-On®3G se décline en plusieurs formats :
• Vecteurs exprimant la protéine régulatrice (Tet3G) avec promoteur CMV ou EF-1α (cellules souches et hématopoïétiques)
• Vecteurs d’expression classiques ou bicistroniques incluant des protéines fluorescentes pour suivre sa protéine d’intérêt
•  Nouveaux vecteurs lentiviraux et rétroviraux : pour les cellules difficiles à transfecter

• Adeno-X™ Adenoviral System 3 (Tet-On® 3G Inducible) :
• Un seul vecteur exprimant la protéine régulatrice Tet3G et le gène d’intérêt
• Clonage facilité du gène d’intérêt grâce à la technologie In-fusion HD
• (1) : Gossen, M., et al (1995) Science 268 (5218) : 1766-1769

 Produits complémentaires au système Tet

• Sérum « Tet System Approved »
• La présence de traces de tétracycline dans les sérums fœtaux bovins utilisés dans les milieux de culture modifie de façon importante les taux d’induction obtenus avec le système Tet. Pour éviter ces artéfacts, Clontech propose un sérum garanti dépourvu de tétracycline et validé en conditions expérimentales.
• Le seul sérum testé de façon fonctionnelle sur cellules inductibles Tet
• Assure le meilleur rapport induction / bruit de fond possible
• Indispensable pour l’expression de protéines toxiques
• Existe en version ES pour les cellules souches embryonnaires

• Lignées cellulaires Tet
• L’établissement de la lignée exprimant la protéine régulatrice (r)tTA constitue la 1ère étape de l’utilisation du système Tet. Clontech propose des lignées stables pré-établies :
• Rigoureusement testées pour leur niveau d’induction
•  Existent en versions Tet-On, Tet-Off, Tet-tTS (induction de shRNA) et maintenant en version Tet-On 3G
• Garantissent un gain de temps pour le développement de votre système d’expression Tet

• Anticorps monoclonal TetR
• Le développement de lignées inductibles Tet nécessite le criblage des clones exprimant la protéine régulatrice (r)tTA. Cette étape est facilitée par l’utilisation de l’anticorps monoclonal TetR (clone 9G9) , qui assure une détection sensible et rapide.
• Très sensible
• Variants de TetR détectés : Tet-On 3G, Tet-On Advanced, Tet-Off Advanced, Tet Repressor (TetR) et Tet-Off
• Idéal pour le criblage des lignées Tet-Advanced en Western blot
• Spécifique