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Purification des Plasmides
FAQ1 – Comment estimer le rendement de mon plasmide ?

comment augmenter le rendement et la pureté des plasmides ?
Le rendement d'un plasmide repose sur le nombre de copies dans les cellules bactériennes. Et le nombre de copies varie en fonction de l'origine de réplication "ORI" présent sur le plasmide.

Quel est le nombre de copies d’un plasmide et quels sont les facteurs qui l’affectent ?
Sommaire

Le nombre de copies et les origines de réplication "ORI" :

Pour estimer le rendement d’un plasmide, il faut vérifier son origine de réplication (ORI). Il y a trois catégories d’ORI dont les caractéristiques sont décrites dans le tableau ci-dessous :

 

les origines de réplications et le nombre de copie des plasmides

Les facteurs impactant le nombre de copies :
Le nombre de copies des plasmides peuvent varier en fonction de plusieurs facteurs :

          - Les inserts :

Les cellules bactériennes ont tendance à maintenir les plasmides avec un faible nombre de copies s'ils contiennent des inserts longs ou des gènes toxiques.

          - Les souches d'E. coli :

Les souches recA1 relA1 permettent de stabiliser les plasmides et d’augmenter ainsi le nombre de copies. Nous recommandons donc la souche DH5α qui est endA1 recA1 pour la purification des plasmides.
Nous recommandons les cellules compétentes Zymo 5α Mix & Go de Zymo Research, souche DH5α, qui permettent une transformation en 20 secondes.

          - Les conditions de culture :

Les cellules fraîches contiennent davantage de plasmides. Nous recommandons d’utiliser des colonies fraîches pour inoculer la culture. Une incubation de nuit entre 12 h et 16 h est recommandée, car la culture est entre la fin de la phase de croissance logarithmique le début de la phase stationnaire. Le nombre de copies des plasmides dans les bactéries est le plus élevé à ce stade.
Les conditions d’aération, la température de culture, la concentration d’antibiotique et le type de milieu de culture peuvent tous impacter le nombre de copies des plasmides.



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